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论文方法大全-柴胡药渣对四逆散芍药苷溶出的影响

2021-03-19 12:04


   在本文的研究中,主要以四逆散古方配伍比例为研究对象,研究经过不同处理步骤后的柴胡药渣,对研究对象中存在的芍药苷溶影响也进行了分析。具体的操作方法如下:不同处理的柴胡药渣可以用药剂的煎煮时间来表示,结合四逆散古方中使用的用药配伍比例,可以考虑用煎煮的方式实现对目标物质的提取过程,为了获得药品中目标物质的所占比率,可以使用HPLC的方法。试验研究的结果如下:对于四逆散而言,它内部存在的物质在与白芍的配合作用下,都会在较大的程度上降低芍药苷的溶解度。在柴胡药渣中,如果加入配伍,就会使得这种物质的溶出程度出现增长的变化状态。特别是在白芍-柴胡、白芍-柴胡-甘草这两种不同的物质配合作用后,并与煎煮时间达到2小时的柴胡药渣进行配合,在这种情况下,芍药苷的成型程度最高,此时的产率比单独煎熬的条件下,可以提升接近445%和99%;白芍-柴胡-枳实这一组不同的物质配合作用后,并与煎煮时间达到4小时的柴胡药渣进行配合,在这种情况下,芍药苷的成型程度最高,此时的产率比单独煎熬的条件下,可以提升接近88%。根据上述的实验步骤和相关的结果,不难得出以下的结论:柴胡药渣中的主要成分在与芍药苷的相互配合过程中,会对其溶出总量产生一定的积极效果,它里面的含有的降解产物在促进芍药苷的溶解方面也具有较大的优势。值得指出的是,其中的木质纤维类产生的影响较小,影响比较剧烈的主要是不同药物之间的配比情况。总体来说,反应过程中,化学作用的效果要比物理作用的效果,更加明显。

 
  白芍作为一种常见的植物,它实际上就是一种干燥根,主要来源于芍药。这种植物味道苦涩略带酸性,材质偏寒,对于人体的肝脏和心脾有较好的保护作用。药学上的功效也相当显著,主要包括活血通络、抑阴防虚、养脾止痛这几个功能。常常用于的治疗症状主要为血虚萎黄,虚汗,腹痛,头晕目眩。关于四逆散的记载,最早可以追溯到古代《伤寒论》,在这其中,就详细的记录了四逆散的可以适用的症状以及其药学功能。所谓的药渣,可以理解为不同的药材,在煎熬煮药的过程中,通过蒸煮和发酵等操作步骤,完成提取药物中对人体的病症能够有效调节的成分后,原来药品剩余在锅炉中的固体杂质就是药渣。它们的主要成分是木质的纤维素。在本文的研究中,主要以四逆散为研究对象,通过对其古代的配方中各药剂的配置比例进行分析,并利用煎煮时间不同的柴胡药渣,与四逆散中的各个药剂成分满足一定的配比条件下,进行混合,归纳总结药渣对四逆散中的芍药苷的影响程度和相关规律,对比分析中药煎剂中的其余成分对主要组成的析出数值的影响情况。相关结论,可以为四逆散进行煎煮的过程中提供指导和参考。
 
  1仪器及试剂
 
  1.1仪器比选
 
  为了实验进程的有效开展,特制专用的实验仪器是必不可少的,其中最重要的便是LC-20AT高效液相色谱系统仪,该仪器本质上是一种紫外可见光的检测装置。其余需要利用到的仪器主要包括,称重的电子天平,加热过程中的水浴锅,药剂储存的冰箱,过滤使用的过滤头,添加药剂使用的一次性注射器,以及一些其它的常见的玻璃仪器。
 
  1.2试剂比选
 
  实验过程中,主要利用到的化学用品主要包括以下几种:分别为甲醇,纯净水,乙腈,标准状态下的芍药苷产品。
 
  1.3材料确定
 
  实验中需要利用的多种药材主要成分,均购买自专业的药材公司,确保药品的品质与效用。在这其中,对一些关键材料的来源与本质有必要进行简单的说明。饮片白芍为芍药的干燥根结构,枳壳为酸橙的干燥幼果,柴胡为植物柴胡的干燥根,炙甘草为甘草的干燥根及根茎。
 
  2结果及分析
 
  2.1实验方法分析
 
  2.1.1色谱条件确定
 
  关于色谱系统仪的使用,需要设置一定的操作条件,主要包括流动相的配置,色谱柱的选择,流速的选择,待测的光线长度,色谱柱的温度条件,进样量等。具体的设置条件如表1所示。
 
  表1色谱参数
 
  流动相色谱柱流速检测波长柱温进样量
 
  乙腈-水(15:85)汉邦C18 0.7 mL•min-1 230 nm 30℃10uL
 
  2.1.2对照品的溶液制取
 
  实验过程中,还需要制备一定的对照溶液。具体的配置过程如下:用电子天平称得10g的芍药苷标准样本,并将这些样品放在容量为50mL的容量瓶中,通过往里面滴加甲醇溶液,将其定容为0.20.2 mg•mL-1的混合,随后经过均匀混合后,静置样品溶液,作为后续使用的对照溶液。
 
  2.1.3样品溶液制取
 
  通过对四逆散古方中,各个药剂的配置比例,将白芍与相同配比的柴胡、枳实、甘草进行混合,并分别以白芍(6 g)单煎、白芍-柴胡、白芍-柴胡-甘草、白芍-柴胡-枳实、总方按表3的比例进行配伍。在溶液制作的过程中,需要加入原溶液10倍体积的水,在浸泡时间达到30min后,用大火进行煮沸,随后更改使用小火,继续煎煮1个小时,每间隔15分钟,测量一次混合物中芍药苷的占比率,用作对比结果含量。根据《伤寒论》中记载,四逆散的主要组成成分如下:柴胡、炙甘草、白芍、枳实,每种材料的质量为6g.
 
  表2各种柴胡药渣制取
 
  根据表2中的操作步骤,将准备好的柴胡药渣1~4,与白芍、枳实、甘草以相同比例进行混合,并用白芍-柴胡药渣、白芍-柴胡药渣-甘草、白芍-柴胡药渣-枳实、白芍-柴胡药渣-甘草-枳实按表3的比例进行配伍。在溶液制作的过程中,需要加入原溶液10倍体积的水,在浸泡时间达到30min后,用大火进行煮沸,随后更改使用小火,继续煎煮1个小时,每间隔15分钟,测量一次混合物中芍药苷的占比率。
 
  表3样品溶液的中药材配比分析
 
  处理时长0.25h 0.5h 0.75h 1h
 
  柴胡-白芍
 
  柴胡纤维-白芍
 
  柴胡-白芍-甘草
 
  柴胡纤维-白芍-甘草
 
  柴胡-白芍-枳实
 
  柴胡纤维-白芍-枳实
 
  柴胡-白芍-甘草-枳实1:1
 
  1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1:1 1:1
 
  1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1:1 1:1
 
  1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1:1 1:1
 
  1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1
 
  1:1:1:1
 
  柴胡纤维-白芍-甘草-枳实1:1:1:1 1:1:1:1 1:1:1:1 1:1:1:1
 
  2.1.4线性关系分析
 
  选择一定的标准样品溶液,将它们经过微孔实现过滤的操作,随后分别加入体积为2 uL、5 uL、8 uL、11 uL、14 uL的样品,并将得到的色谱图进行记录,根据显示的结果,对进样的质量进行线性回归处理,根据表3中的相关数据,不难得到线性回归之后的方程,具体的结果如下:y=254452x-38664,系数R²=0.9999。
 
  表4标准条件下的芍药苷含量与峰面积
 
  进样量﹙µl﹚芍药苷量﹙µg﹚峰面积
 
  2
 
  5
 
  8
 
  11
 
  14 0.4
 
  1.0
 
  1.6
 
  2.2
 
  2.8 454781
 
  1245731
 
  2013217
 
  2753216
 
  3517821
 
  A.芍药苷的标品色谱
 
  B.芍药苷的试品色谱
 
  图1测定的芍药苷HPLC图
 
  2.1.5稳定性分析
 
  为了有效地开展稳定性的检验过程,首先需要精确地量取白芍在单独煎熬的条件下,制成的试样溶液10 uL,在满足前述的色谱工作条件的情况下,按照四个小时的频率加入该体积的样品,结合得到的色谱结果图,计算出峰的面积,并且需要测定五次,并取平均结果。根据测量,峰面积的平均结果为5312090,相对标准偏差为1.17%。
 
  2.1.6重复性试验
 
  为了有效地开展重复性的检验过程,首先需要精确地量取同批次的白芍样品5g,合计5份,与制作样品溶液的方法一致,最终可以得到5份一样的样品。在满足前述的色谱工作条件的情况下,不难得到色谱结果图,计算出峰的面积,可以计算出样品中芍药苷的浓度大小。根据测量计算,芍药苷的平均值为2.30 mg•g-1,相对标准偏差为2.6%。
 
  2.1.7加样回收率试验
 
  为了有效地开展回收率的测试过程,首先需要精确地量取在单独煎熬的条件下,制成的试样溶液1mL,并且与溶度为0.2 mg•mL﹣1的芍药苷标准品溶液混合,共计5份,并将混合溶液放在容积为10mL的容量瓶中,利用甲醇进行滴定,定容至目标的位置,再静置适宜的时间。在满足前述的色谱工作条件的情况下,不难得到色谱结果图,进样量为10µL,计算出峰的面积,可以计算出样品的回收率。根据测量计算,回收率均高达95%,平均结果为98.5%,相对标准偏差为2.15%。
 
  2.2结果及分析
 
  2.2.1各种试验组各种煎煮时间下的芍药苷煎出量分析
 
  表5各种试验组各种煎煮时间下的芍药苷煎出量
 
  处理环节芍药苷煎出量(g·g﹣1﹚
 
  0.25h 0.5h 0.75h 1h相对于白芍单煎芍药苷变化(基于1h煎出量为基准)
 
  白芍单煎900 2050 2250 2290/
 
  白芍-柴胡(1:1)640 750 830 830-0.64
 
  白芍-柴胡药渣1(1:1)5220 8630 6030 8550+2.73
 
  白芍-柴胡药渣2(1:1)6970 11400 14050 12470+4.45
 
  白芍-柴胡药渣3(1:1)4860 5520 6000 7130+2.11
 
  白芍-柴胡药渣4(1:1)170 160 2000 160-0.93
 
  白芍-柴胡-枳实(1:1:1)640 860 620 890-0.61
 
  白芍-柴胡药渣1-枳实(1:1:1)1200 1120 1320 2040-0.11
 
  白芍-柴胡药渣2-枳实(1:1:1)1160 1130 1110 970-0.58
 
  白芍-柴胡药渣3-枳实(1:1:1)590 600 580 870-0.62
 
  白芍-柴胡药渣4-枳实(1:1:1)3000 3110 3610 4300+0.88
 
  白芍-柴胡-甘草(1:1:1)540 900 960 890-0.61
 
  白芍-柴胡药渣1-甘草(1:1:1)290 350 380 610-0.73
 
  白芍-柴胡药渣2-甘草(1:1:1)3.45 3430 4410 4550+0.99
 
  白芍-柴胡药渣3-甘草(1:1:1)2560 3170 3240 4480+0.96
 
  白芍-柴胡药渣4-甘草(1:1:1)3530 3290 3320 4430+0.93
 
  白芍-柴胡-枳实-甘草(1:1:1:1)530 600 770 530-0.77
 
  白芍-柴胡药渣1-枳实-甘草(1:1:1:1)290 410 460 890-0.61
 
  白芍-柴胡药渣2-枳实-甘草(1:1:1:1)260 320 440 590-0.74
 
  白芍-柴胡药渣3-枳实-甘草(1:1:1:1)840 1750 1020 870-0.62
 
  白芍-柴胡药渣4-枳实-甘草(1:1:1:1)1030 1340 1940 1300-0.43
 
  根据表4显示的数据来看,各种药料的配比条件下,都会使得芍药苷的占比发生一定程度上的降低;当考虑柴胡药渣与白芍、甘草相配时,在经过煎煮之后,芍药苷的析出值更大;当白芍、柴胡与枳实相配时,在经过四小时后的蒸煮,芍药苷的析出结果也得到了提高。但是,对于总方而言,各种不同的配伍情况下,均会导致芍药苷的量急剧的降低。
 
  2.2.2各种处理柴胡药渣的方式对芍药苷溶出的分析
 
  图2白芍-柴胡芍药苷含量变化趋势
 
  图3白芍-柴胡-枳实芍药苷含量变化趋势
 
  图4白芍-柴胡-甘草芍药苷含量变化趋势
 
  图5四逆散古方芍药苷含量变化趋势
 
  根据图2给出的结果,不难看出:白芍与柴胡的配伍阻碍了芍药苷的溶出,除了4号柴胡药渣外,其余柴胡残渣中的芍药苷溶出量较单一的白芍,明显增加,该数值获得最大的情况是柴胡药渣2与白芍配伍。根据图3给出的结果来看,为了获得最大的芍药苷溶出量,需要将白芍-柴胡-枳实配伍。根据图4给出的结果来看,除了药渣序号1,在白芍-柴胡-甘草配伍的条件下,均能够较大程度的促进芍药苷的溶出,就结果来看,柴胡药渣2的促进作用最明显。根据图5给出的结果来看,四逆散总方中的芍药苷比重最低,无论是与哪种条件下的单独煎熬溶液相比,但是在与柴胡废渣3和4进行配合时,芍药苷的析出结果会发生一定程度的上升。


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